Sterilisasi dan Pembuatan Media

Dalam melakukan diagnosa mikrobiologi sterilisasi sangat diutamakan baik alat maupun medianya. Suatu alat dikatakan steril apabila alat atau bahan bebas dari mikroba baik bentuk vegetative maupun spora. Untuk itu sebagai pemula dalam mikrobiologi sangat perlu mengenal teknik sterilisasi dan pembuatan media.

       a. Apa yang dimaksud Sterilisasi ?

Sterilisasi dalam mikrobiologi berarti membebaskan tiap benda atau substansi dari semua kehidupan mikroorganisme. Fungsi dari sterilisasi ini yaitu untuk menghilangkan seluruh mikroorganisme yang ada pada alat-alat yang akan digunakan selama praktikum. Pada prinsipnya sterilisasi dapat dilakukan dengan tiga cara yaitu secara mekanik, fisik, dan kimiawi. 

b. Jenis-Jenis Sterilisasi

1 1. Sterilisasi Fisik

Sterilisasi fisik merupakan sterilisasi yang prinsip kerjanya menggunakan panas. Sterilisasi dengan panas terbagi atas empat, yaitu pemijaran, panas kering, uap air panas, dan uap air bertekanan. Dalam praktikum sterilisasi fisik yang digunakan yaitu sterilisasi pemijaran dengan menggunakan bunsen dan sterilisasi uap air bertekanan dengan autoclave.

2 

   2.  Sterilisasi Kimia

Sterilisasi kimia merupakan sterilisasi yang menggunakan senyawa kimia seperti alkohol, larutan formalin dan sebagainya. 

3 3.   Sterilisasi Mekanik

Sterilisasi secara mekanik, digunakan untuk beberapa bahan yang akibat pemanasan tinggi atau tekanan tinggi akan mengalami perubahan, misalnya adalah dengan saringan/filter. Sistem kerja filter, seperti pada saringan lain adalah melakukan seleksi terhadap partikel-partikel yang lewat (dalam hal ini adalah mikroba).

c. Autoclave

   Sterilisasi media yang sering dilakukan dengan menggunakan autoclave yang menggunakan panas bertekanan yang disebabkan uap air. Sterilisasi dapat terlaksana bila mencapai tekanan 1 atm dan suhu 121⁰C selama 15 menit. 

 Gambar Autoclave

d. Bagaimana cara alkohol membunuh bakteri ?

Alkohol bekerja mendenaturasi protein dari sel bakteri sehingga bakteri akan mati dan umumnya dibuat dalam campuran air pada konsentrasi 70%-90%. Alkohol bersifat bakterisid yang cepat, digunakan sebagai antiseptik kulit dan pengawet. Alkohol akan bekerja maksimal pada konsentrasi 60-80%. Konsentrasi terbaik alkohol sebagai antiseptik adalah 60-80%. Konsentrasi alkohol lebih tinggi mengurangi kemampuannya dalam mendenaturasi protein karena denaturasi protein membutuhkan air sedangkan apabila konsentrasi alkohol kurang maka tidak akan efektif membunuh bakteri.

Gambar Alkohol

      

    e. Media 

Media yang merupakan media tempat tumbuh dan tempat perkembangbiakan mikroba. Media-media yang digunakan merupakan media yang harus sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan diteliti harus baik dan terbebas dari kontaminasi mikroorganisme lain. Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Media terbagi atas tiga, yaitu media sintesis, media semi sintesis, dan media alami.

1. Media Sintesis

Media sintesis adalah salah satu jenis media yang komposisi zat dan takarannya diketahui dengan jelas. Zat-zat buatan yang digunakan merupakan ekstrak dari bahan-bahan yang mengandung nutrisi sesuai dengan kebutuhan mikroba seperti ekstrak daging, kentang, ragi dan sebagainya.  Media sintetik yang digunakan pada praktikum ini yaitu media NA (Nutrient Agar), PDA (Potato Dextrose Agar), dan PCA (Plate Count Agar) yang komposisi pembuatan serta takarannya telah ditentukan. 

- PCA

       PCA (Plate Count Agar) merupakan media yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme seperti bakteri, kapang dan khamir. Cara pembuatannya yaitu Ditimbang 5,25gr PCA dan dimasukan ke dalam Erlenmeyer. Dilarutkan dengan 250ml aquades, lalu dihomogenkan dan dipanaskan di hot plate sambil diaduk hingga larutan mendidih. Ditutup dengan alumunium foil. Disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121^oC selama 15 menit. Hal ini sesuai dengan pernyataan Addina (2014), Bahwa PCA merupakan media pertumbuhan semua jenis mikroorganisme. Komposisi PCA terdiri dari   0,5%  trypton,  0,25%  ekstrak  ragi,  0,1%  glukosa,  1,5%  agar-agar.

 Gambar PCA

- NA

                 NA (Nutrient Agar) kebanyakan digunakan untuk bahan yang ditumbuhi bakteri. Cara pembuatan Na melarutkan  bahan  nutrient  agar  ke dalam  1000ml  air  kemudian  dipanaskan  hingga  mendidih  dan  dituangkan  ke dalam tabung  dan  disterilkan  selama  15  menit  pada  suhu  121^oC. Hal ini sesuai dengan pernyataan Addina (2014), bahwa NA (Nutrient Agar) merupakan suatu media yang mengandung sumber nitrogen dalam jumlah cukup  yang  dapat  digunakan  untuk  budidaya  bakteri.

 Gambar NA

- PDA

      PDA (Potato Dextrose Agar) merupakan media yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme jenis kapang dan khamir.  Komposisi PDA terdiri atas kentang 200gr, dekstrosa 10gr, agar 15gr, aquades 1000ml. Hal ini sesuai dengan pernyataan         Cappucino & Sherman (2014), bahwa PDA merupakan media yang cocok untuk pertumbuhan jamur karena dapat menghindari kontaminasi bakteri dengan keasaman pada media yang rendah.

 Gambar PDA

2. Media Semi-Sintesis

            Media semi-sintesis merupakan medium yang sebagian komposisi dan takarannya diketahui secara pasti. Tersusun oleh campuran bahan-bahan alami dan bahan-bahan sintetis. Contohnya adalah kentang agar dan touge agar yang dicampur dengan media sintetik yaitu agar.

- Kentang Agar

            Kentang agar merupakan media semi sintesis yang dapat digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme jenis kapang. Adapun komposisi dari kentang agar yaitu Komposisinya terdiri dari kentang 150gr, gula 10gr, dan aquades 1000ml.

 

 Gambar Media Kentang Agar

- Tauge Agar

            Tauge agar termasuk medium semi alamiah karena tersusun atas bahan alami (tauge) dan bahan sintesis (sukrosa dan agar). Tauge agar digunakan untuk menumbuhkan khamir dan kapang. Komposisinya terdiri dari tauge 10%, sukrosa 6%, Aquades 200ml, Agar 1,5%. 

         

       Gambar Media Tauge Agar

3. Media Alami

    Media alami merupakan media yang langsung berasal dari alam atau media yang terbentuk sendiri tanpa campur tangan manusia.

- Tanah
Tanah merupakan salah satu contoh dari media alami karena tanah merupakan habitat bagi mikroorganisme.  Komposisi tanah berupa zat organik, mineral, udara, dan air.

Video Sterilisasi dan Pembuatan Media

DAFTAR PUSTAKA

Addina G. 2014. Evaluasi kadar bakteri di udara dengan menggunakan media plate count agar(pca) berdasarkan tinggi secara vertikal di departemen bedah mulut RSGMP FKG USU dengan metode total plate count (tpc). Universitas Sumatera Utara. Medan

Cappucino, J, G., & Sherman, N. 2014.   Manual Laboratorium Mikrobiologi Edisi 8, Jakarta, EGC

Desiyanto, Fajar Ardi dan Djannah Sitti Nur. 2013. Efektivitas Mencuci Tangan Menggunakan Cairan Pembersih Tangan Antiseptik (Hand Sanitizer) Terhadap Jumlah Angka Kuman. Jurnal Vol 7 No 2. Yogyakarta: Universitas Ahmad Dahlan.

Elisabeth, R., Apriliana,E., dan Rukmono, P. 2012. Uji Efektivitas Pada Antiseptik di Unit Perinatologi Rumah Sakit Umum Abdul Moeloek Bandar Lampung. Medical Jurnal of Lampung University .

Fajarini, nindi nazula dkk. 2014. Materi Praktikum Mikrobiologi. Malang. Umm

Fathir, dkk. 2009. Mikrobiologi Dasar. Jakarta:  Erlangga.

Gruendemann, B.J dan Fernsebner, B. 2006. Buku Ajar Keperawatan Perioperatif. Volume 2. Jakarta: EGC.

Gunawan AW, dkk. 2006. Cendawan dalam Praktek Laboratorium. IPB Press: Bogor

Lay, W. B. 1994. Analisis Mikrobiologi di Laboratorium. Penerbit PT, Jakarta

Pelczar, Micheal J. F dan Chan E.C.S,. 1996. Dasar-Dasar Mikrobiologi Jilid 2. UIT Press: Jakarta.

Pradhika. 2008. Menentukan Ukuran Mikroba pada Pangan. Universitas Islam Negeri: Malang

Suriawiria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar. Papas Sinar Sinanti. Jakarta